НАБОР КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ СУПРАВИТАЛЬНОГО ОКРАШИВАНИЯ МОЧИ

Общая информация
Характеристики набора
Фотографии окрашенных препаратов осадка мочи
Заключение

Диагностика многих заболеваний мочевыводящих путей основана на микроскопическом исследовании осадка мочи. Интерпретация результатов традиционного без красителей исследования не редко вызывает затруднения и, вследствие этого, часть важной диагностической информации теряется.
Микроскопия нативных препаратов традиционно используется в отечественной клинической лабораторной диагностике при исследовании мочи. В странах Западной Европы принято исследовать осадки мочи окрашенные суправитально. Для этого применяются специально подготовленные стекла, на которые предварительно импрегнирован краситель или используются специальные суправитальные красители.
Красители для суправитального окрашивания осадка мочи предназначены для стандартизации исследования, более четкой идентификации клеток, особенно атипичных, и других элементов осадка мочи. Метод с использованием данных красителей рекомендован Европейской группой анализа мочи в рамках Европейской конфедерации лабораторной медицины (European Urinalysis Group under European Confederation of Laboratory Medicine) как для обычной микроскопии, так и для фазовоконтрастной.
Компания Erba Lachema" поставляет в Россию один из таких красителей, изготавливаемый в Финляндии.

Характеристики набора

Реактивы

флакон с 50 мл реактива синего цвета
флакон с 50 мл реактива красного цвета

Реактивы стабильные, хранятся при температуре (+10 - +25)⁰C. Срок годности указан на упаковке.
Приготовление рабочей смеси: реактивы смешиваются в соотношении 1: 1. Рабочая смесь хранится при комнатной температуре в течение 3 месяцев в защищенном от света месте, в посуде из темного стекла. В готовой смеси при хранении может образовываться осадок. При появлении осадка смесь реактивов необходимо профильтровать через миллипоровый фильтр с диаметром отверстий 0,45 мкм.

Методика окраски осадка мочи
В 0,5 мл осадка мочи ввести с помощью пипетки 50 мкл смеси реактивов (1- 2 капли) и размешать. Через 5 мин нанести с помощью пипетки 20 мкл окрашенного осадка мочи на предметное стекло и покрыть покровным стеклом размером 18 × 18 мм или 22 ×22 мм или заполнить камеру слайд-планшета. Микроскопическое исследование окрашенного осадка проводить сначала на малом увеличении микроскопа (80х , 100х или 200х), а затем на большом (400х).
Примечание: при рН >7,0 и относительной плотности мочи > 1,030 краска может выпадать в осадок.

Фотографии окрашенных препаратов осадка мочи

	Суправитальная окраска осадка мочи. Ув.400х А. Три клетки поверхностного ороговевающего многослойного плоского эпителия. Гомогенная бесструктурная цитоплазма полигональных клеток окрасились в бледно-розовый цвет, ядра - в темно-синий цвет. Б. Группа клеток многослойного плоского эпителия без ороговения. Цитоплазма гомогенная, окрашивается в ярко-розовый цвет, а ядра круглой и овальной формы, расположенные центрально, - в синий цвет.
	Суправитальная окраска осадка мочи. Ув.400х А. На фоне нейтрофилов и тяжей слизи, окрашенной в светло-голубой цвет, расположена крупная, неправильной формы двуядерная клетка поверхностного слоя переходного эпителия. Цитоплазма клетки мелкозернистая, окрашена в темно-розовый цвет. Ядра одинакового размера, круглые темно-синего цвета. Б. На фоне тяжей слизи расположены две клетки переходного эпителия. Одна – неправильной полигональной формы с 2 темно-синими ядрами и темно-розовой мелкозернистой цитоплазмой, другая – правильной овальной формы с темно-синим ядром и темно-розовой цитоплазмой.
	Клетки почечного эпителия неправильной формы, расположены в виде дорожки и разрозненно. Цитоплазма плотной консистенции, окрашена в темно-розовый цвет. Ядра занимают меньшую часть клетки округлой формы темно-синего цвета. Суправитальная окраска осадка мочи. Ув.400х
	Пласт пролиферирующих клеток почечного эпителия в состоянии жировой дистрофии, клетки имеют правильную круглую форму и резко увеличены в размерах. Цитоплазма темно-розового цвета с большим количеством мелких, бесцветных капель жира. Ядра темно-синие, круглой формы, занимают половину клетки, содержат единичные ядрышки. Суправитальная окраска. Иммерсия. Ув.1000х
	Нейтрофилы в осадке мочи при суправитальной окраске А. Цитоплазма клеток темно-розового цвета и темно-синие сегментированные или в виде палочек ядра, занимающие меньшую часть клетки. Зернистые массы синего цвета - выпавшая в осадок краска. Ув. 400х. Б. Синего цвета сегментированные ядра клеток на фоне зернистой розовой цитоплазмы, рядом расположена тяжистая, окрашенная в голубой цвет слизь. Иммерсия. Ув.1000х
	Гиалиновые цилиндры при суправитальной окраске А. Гиалиновый цилиндр голубого цвета четко контурированный, объемный, практически бесструктурный Иммерсия. Ув. 1000х Б. Гиалиновый цилиндр, на поверхности которого расположены мелкие измененные (дисморфные) эритроциты. Ув.400х.
	Гигантский гиалиновый цилиндр темно-голубого цвета, маленький гиалиновый цилиндр плотный, гомогенный, с наложением клетки розового цвета (внизу препарата) и небольшой узкий, четко контурированный вишневого цвета восковидный цилиндр (справа). Все цилиндры лежат на фоне нежной тяжистой слизи. Суправитальная окраска осадка мочи. Ув.400х.
	Два темно-синих гиалиновых цилиндра наложились на широкий гомогенный восковидный цилиндр вишневого цвета, слизь рыхлая, голубого цвета (цилиндроид). Суправитальная окраска осадка мочи. Ув.400х.
	Гомогенный восковидный цилиндр короткий, овальной формы, плотный, светло-вишневого цвета, с наложением мелких дисморфных эритроцитов (в центре), рядом - клетка ороговевающего плоского эпителия с бедно-розовой цитоплазмой и крошечным пикнотичным бесструктурным темно-синим ядром. Суправитальная окраска осадка мочи. Ув.400х.
	Обломок гомогенного широкого «терминального» восковидного цилиндра и пять зернистых цилиндров темно-синего цвета. Справа, между короткими зернистыми цилиндрами расположена клетка почечного эпителия. Суправитальная окраска. Ув.400х.
	Почти бесцветный, кристалл оксалата кальция в виде октаэдра, три ярко-голубые, овоидные кристаллы оксалата кальция и темно-розовые эритроциты на фоне слизи, окрашенной в голубой цвет Суправитальная окраска. Ув.400х.
	Бесцветные споры и псевдомицелий гриба Candida albicans на фоне голубой рыхлой слизи. Суправитальная окраска. Ув.400х.
	Комплекс из злокачественных клеток в осадке мочи А. Нативный препарат. В поле зрения на фоне детрита, эритроцитов и лейкоцитов расположен комплекс из злокачественных клеток. Переходноклеточный рак мочевого пузыря. Ув.400х. Б. Суправитальная окраска того же осадка мочи. Иммерсия. Ув. 1000х. На фоне сегментоядерных нейтрофилов расположен комплекс из злокачественных клеток разных размеров, с зернистой темно-розовой цитоплазмой, в которой располагаются разного размера, структуры и формы темно-синие ядра. Соотношение ядра и цитоплазмы в этих клетках сдвинуто в сторону ядра.

Заключение

Представленные микрофотографии доказывают необходимость применения суправитальной окраски при исследовании патологических осадков мочи. Суправитальная окраска позволяет провести дифференциацию клеток плоского и переходного эпителия, без особого труда отличить при увеличении 400х клетки почечного эпителия от лейкоцитов, что достаточно трудно при исследовании этих элементов осадка в практически бесцветной моче. В нативных препаратах очень сложно оценить степень цилиндрурии, представленной бесцветными нежными гиалиновыми цилиндрами. Суправитальный краситель делает гиалиновые цилиндры хорошо различимыми, окрашивая их в голубой цвет. Различное восприятие окраски гиалиновыми и восковидными цилиндрами позволяет легко отличать их друг от друга. Микроскопическое исследование осадка мочи позволяет увидеть на голубой гиалиновой поверхности цилиндра зернистые массы, образовавшиеся при разрушении клеток почечного эпителия. В этих препаратах легко дифференцировать клетки почечного эпителия и нейтрофилы, наслоившиеся на гиалиновые цилиндры, а дисморфные эритроциты достаточно четко различимы не только на гиалиновой, но и на восковидной основе. При любой суправитальной окраске живые объекты в осадке мочи не окрашиваются, что позволяет легко обнаружить бесцветные споры гриба и нити мицелия на цветовом фоне препарата. В то же время кристаллы оксалата кальция овоидной формы хорошо окрашиваются, как в желтушной моче, так и при суправитальной окраске.
Суправитальную окраску специалисты настоятельно рекомендуют применять для просмотра осадка при подозрении на наличие злокачественных клеток. По-видимому, эту окраску можно использовать при исследовании клеточных элементов в выпотных жидкостях для дифференциации нормальных и патологических клеточных элементов, таких как мезотелий и клетки злокачественных новообразований.
Применение суправитальной окраски, несомненно, увеличивает точность и качество микроскопического исследования осадков мочи. Практический опыт специалистов при исследовании осадков мочи от больных нефрологического и урологического отделений многопрофильной больницы и опыт использования данного метода в обучении курсантов на циклах усовершенствования позволяет рекомендовать суправитальную окраску осадка мочи для широкого применения в клинико-диагностических лабораториях.

назад

на главную
вперед